一、血小板凍干設計規劃 

1. 預處理與保護劑選擇 

   保護劑：采用二糖聯合DMSO，通過37℃孵育4小時負載至胞內，提高凍干存活率。 

    抑制劑：添加可逆性激活抑制劑（如PGE-1、腺苷），減少凍干前血小板自發活化。 

2. 預凍參數優化 

    凍結速率設計：20℃/min降至-40℃，預凍速率設計； 

    退火處理：以1-1.5℃/min升溫至-30或-35℃，維持0.5小時，減少冰晶形成。 

3. 凍干工藝 

    一級干燥：板層溫度-20℃/-40℃，真空度≤1Pa，持續24-72小時； 

    二級干燥：升溫至15℃（Tg以下），真空度≤1 Pa，持續2-6小時。 

二、CD34干細胞凍干設計規劃 

1. 細胞動員與采集 

    使用集落刺激因子（G-CSF或GM-CSF）聯合化療藥物（如環磷酰胺）動員外周血干細胞，確保CD34+細胞濃度≥5×10^6/kg。 

2. 凍干前處理 

   離心洗滌：去除血漿及雜質，重懸于含10% FBS的培養基； 

   保護劑添加：二糖+ DMSO，4℃緩慢滲透（5-45分鐘）。 

3. 凍干參數 

   預凍：-80℃超低溫預凍過夜，或液氮速凍（-196℃）； 

   干燥：冷阱溫度-85℃，板層溫度梯度升至-30℃/-20℃，真空度≤1 Pa，持續24-72小時。 

凍干后活性及關鍵指標設定 

一、血小板凍干后指標 

1. 功能活性 

    聚集功能：對凝血酶（1 U/mL）、ADP（20 μmol/L）的最大聚集率≥70%； 

   活化標志物：CD62p表達率≤40%，PAC-1表達率≤5%（流式細胞術檢測）。 

2. 形態學評估 

   掃描電鏡顯示細胞膜完整，無明顯冰晶損傷。 

3. 促凝血功能 

   凝血酶時間（TT）與新鮮血小板差異＜10%。 

二、CD34干細胞凍干后指標 

1. 細胞活性 

   存活率：凍干后細胞存活率≥70%（臺盼藍染色）； 

    CD34+細胞比例：≥2×10^6/kg（流式細胞術檢測）。 

2. 分化潛能 

    髓系分化：在體外分化培養后，CD11b+細胞比例≥30%； 

   淋巴系分化：CD19+細胞比例≥15%。 

3. 植入率 

    移植后外周血CD34+細胞水平恢復至≥0.5×10^6/kg（臨床移植標準）。 

血小板&CD34干細胞凍干設計細節要求

凍干工藝要求 

一、血小板凍干要求 

1. 保護劑與抑制劑 

   保護劑需預過濾（0.22 μm），避免顆粒污染； 

   抑制劑（如PGE-1）需在無菌條件下添加。 

3. 復水驗證 

   復水后血小板回收率≥50%，體積恢復率≥90%。 

二、CD34干細胞凍干要求 

需針對其生物學特性設計工藝，核心要求包括保護劑優化、凍干參數精準控制及活性指標驗證。

總結：血小板需重點保障聚集功能與活化水平，而CD34干細胞需關注細胞活性及分化潛能。需結合實際進行保護劑賦型劑及抑制劑的開發。